地锦草片是由地锦草组成的中药单方制剂，具有清热解毒，凉血止血之功能，用于痢疾，肠炎，咳血，尿血，便血，崩漏，臃肿疮疔。在本文中，采用HPLC测定地锦草片中地锦草的含量

中药的有效成分分析和质量控制一直困扰着广大中药工作者。地锦草片是由地锦草组成的中药单方制剂，具有清热解毒，凉血止血之功能，用于痢疾，肠炎，咳血，尿血，便血，崩漏，臃肿疮疔。根据文献报道，地锦草中含黄酮类、生物碱类、鞣质、没食子酸甲酯、没食子酸等化学成分。没食子酸具有抗菌抗病毒，抗肿瘤等功效，与该制剂功效相符，故以没食子酸为定量指标，制定该制剂含量测定项。

仪器与试药

在本次实验中，所采用的仪器是日本岛津LC-2010C CLSS-VP工作站。以甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为纯化水。所用对照品为没食子酸对照品（纯度99.0%），用中国药品生物制品检定所（批号0831-9501）提供。

HPLC测定没食子酸的含量

色谱条件

色谱柱为Phenomenex（C18，5mm，250mm×4.6mm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（5∶95∶1）；柱温设定在30℃；流速为1.0ml·min-1；检测波长272nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000。

提取方法及时间考察

取同一批号（20030701）样品20片，除去包衣，研细，精密称取0.5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，分别回流、超声提取1小时。放冷，称定重量，再补足减失的重量，用微孔滤膜过滤，按色谱条件A分析，测定没食子酸峰面积。结果见表1。

经测定，采用加热回流提取时，样品中没食子酸峰面积较大，因此采用回流的方法提取（峰面积比 = 实际峰面积/称样量×0.5，即折合成0.5g时的峰面积，以下均同）。

取同一批号（20030701）样品20片，除去包衣，研细，精密称取0.5g，共6份，分别精密加入甲醇50ml、70%甲醇50ml及50%甲醇50ml, 称定重量，加热回流1小时，放冷，称定重量，用各自的溶剂补足减失的重量，按色谱条件分析，测定没食子酸峰面积。结果见表2。

经测定，采用50%甲醇提取时，样品中没食子酸峰面积较高，因此采用50%甲醇作为溶剂提取。

提取时间的选择

取同一批号（20030701）样品20片，除去包衣，研细，精密称取0.5g，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，分别加热回流20、40、60、90、120min，放冷，称定重量，用50%甲醇补足各自减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，按色谱条件分析，测定没食子酸峰面积。结果见表3。

所得结果比较，回流40min所测得没食子酸峰面积与回流20min、60 min、90 min、120 min，所测得没食子酸峰面积比较无明显变化，故采用回流40 min提取。

溶液的制备

对照品溶液的制备，取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液，摇匀，精密量取5ml，注入液相色谱仪中，按色谱条件分析，即得。

供试品溶液的制备，取本品20片（批号：20030701），除去包衣，精密称定，研细，精密称取0.5g，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，加热回流40min，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25μl量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

精密称取没食子酸对照品10.73mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液，分别精密量取1，1.5，5，7.5，10及25ml，即制成0.008584、0.02146、0.04292、0.06438、0.08584、0.2146 mg/ml的溶液，分别精密吸取5ml，注入液相色谱仪中，按色谱条件分析，测定峰面积，以对照品进样量（mg）为横坐标，峰面积为纵坐标，求回归方程：y=3.108×106 X -3.516×104r=0.9999。结果表明没食子酸在0.04292～1.073mg范围内线性良好，结果见表4。

精密度试验

取本品20片（批号：20030701），除去包衣，研细，精密称取0.5g，精密加入50%甲醇50ml，按照供试品溶液制备操作，按色谱条件分析，连续进样6次，测定没食子酸的峰面积，测得各自峰面积值的RSD为0.20%，符合要求，结果见表5。

重现性试验

取本品20片（批号：20030701），除去包衣，研细，精密称取0.5g，共6份，精密加入50%甲醇50ml，按照供试品溶液制备操作，按色谱条件分析，测定各自没食子酸含量，测得平均含量为1.44%，RSD为0.84%，符合要求，结果见表6。

回收率试验

本品20片（批号：20030701，含量为1.44%），除去包衣，精密称定，研细，精密称取 0.25g，共6份，分别精密加入没食子酸对照品溶液（0.0741mg/ml）50ml，再按照“2.3.2”项下制备供回收率测定用供试品溶液，按色谱条件分析，计算回收率，结果平均回收率为101.36%，RSD为1.21%。结果见表7。

讨论

目前用高效液相色谱法测定中成药的有效成分的含量已广为采用，本试验采用适当的提取方法排除干扰。由试验可知，此方法准确度高，灵敏度高，重现性好，可作为地锦草片质量检测的常规方法，有效地控制药品质量，确保临床用药的有效性。